Desktop STEM als screening tool voor Cryo-EM

Monstervoorbereiding voor cryogene elektronenmicroscopie (cryo-EM) is een veeleisend en duur proces, waarbij verschillende zuiverings- en screeningsstappen nodig zijn om een bruikbaar preparaat te bekomen. Negative stain electron microscopy (EM) is een van de algemeen aanvaarde monstervoorbereidingstechnieken voor de eerste screening van gezuiverde monsters, en dan specifiek voor de beoordeling van pathologie, morfologie, concentratie en agglomeratie. Traditioneel wordt hiervoor een conventionele transmissie-elektronenmicroscoop (TEM) gebruikt. Met de introductie van de desktop scanning transmissie elektronenmicroscoop (STEM) is een alternatieve oplossing voor het screenen van monsters ontwikkeld die een stuk sneller en kosten-effectiever is dan de traditionele methoden.

Monstervoorbereiding voor Cryo-EM

Cryogene elektronenmicroscopie (cryo-EM) is uitgegroeid tot een hulpmiddel van onschatbare waarde op het gebied van structurele biologie, waarmee onderzoekers vanuit 2D-beelden bij verschillende oriëntaties driedimensionale structuren kunnen visualiseren met behulp van geavanceerde computationele technieken met een bijna-atomaire resolutie.

Cryo-EM is een arbeidsintensieve en tijdrovende techniek die zeer gespecialiseerde vaardigheden vereist. Een cruciaal hulpmiddel bij de monstervoorbereiding voor (3D) TEM is het ultramicrotoom.

Een typische exponent van deze technologie, de RMC Boeckeler ATUMtome (Automated Tape Collecting Ultramicrotome) is in staat om volautomatisch honderden tot duizenden coupes van enkele tientallen nanometers dikte te produceren. Hiermee wordt ingespeeld op de duidelijke evolutie van 2D naar 3D (cryo) – EM. Een interessante applicatienota in verband hiermee is de beeldvorming van mitochondriale uitstulpingen in zenuwcellen.

Lees de Application Note hier

Goede Cryo-EM resultaten hangen ook af van de zeer hoge kwaliteit van de gezuiverde monsters. Voordat een monster wordt geverifieerd voor beeldvorming met hoge resolutie, wordt het meestal gescreend om er zeker van te zijn dat het geschikt is voor beeldvorming en de verwachte afmetingen en morfologieën bevat.