La préparation des échantillons pour la microscopie électronique cryogénique (cryo-ME) est un processus exigeant et coûteux, nécessitant plusieurs étapes de purification et de screening pour obtenir un échantillon utilisable. La microscopie électronique (ME) à coloration négative est l’une des techniques de préparation d’échantillons les plus couramment acceptées pour le screening initial des échantillons purifiés, en particulier pour l’évaluation de la pathologie, de la morphologie, de la concentration et de l’agglomération. Traditionnellement, un microscope électronique à transmission (MET) conventionnel est utilisé à cet effet. Avec l’introduction du microscope électronique à balayage (MEB) de table par transmission (STEM), une solution alternative pour le screening des échantillons a été développée, qui est beaucoup plus rapide et plus rentable que les méthodes traditionnelles.
Préparation des échantillons pour la Cryo-ME
La microscopie électronique cryogénique (cryo-ME) est devenue un outil indispensable dans le domaine de la biologie structurale, permettant aux chercheurs de visualiser des structures tridimensionnelles à partir d’images 2D dans différentes orientations en utilisant des techniques de computation avancées avec une résolution quasi-atomique.
La cryo-ME est une technique à forte intensité de main-d’œuvre et de temps qui nécessite des compétences très spécifiques. L’ultramicrotome est un outil essentiel dans la préparation des échantillons pour la MET (3D).
Le RMC Boeckeler ATUMtome (Automated Tape Collecting Ultramicrotome) est un exemple typique de cette technologie. Il est capable de produire des centaines, voire des milliers de sections de plusieurs dizaines de nanomètres d’épaisseur de manière entièrement automatique. Cela correspond à l’évolution évidente de la 2D vers la 3D (cryo)-ME. Une application intéressante à cet égard est l’imagerie des protubérances mitochondriales dans les cellules nerveuses.
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De bons résultats en cryo-ME dépendent également de la très haute qualité des échantillons purifiés. Avant qu’un échantillon ne soit vérifié pour l’imagerie à haute résolution, il est généralement examiné pour s’assurer qu’il est adapté à l’imagerie et qu’il contient les dimensions et les morphologies attendues.
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